B6J.Rag1 KO等位基因敲除是在杰克森实验室罕见病和孤儿病研究中心使用 CRISPR/Cas9核酸内切酶介导的基因组编辑产生的。 选择向导RNA [AAGTGTCCCCAAATATTGTC；GCACCTAGCACATTGCCATG] 靶向2号染色体上重组激活基因1 (Rag1) 第二个外显子 侧翼的内含子DNA。未使用寡核苷酸供体序列。 将这些向导和 Cas9 核酸酶导入单细胞C57BL/6J受精卵，并转移到假孕的雌鼠中。 靶向区域的 DNA 测序确定了1只雄鼠（首建鼠5410）携带3527-nt缺失（AGTATAAGTGTCCCCAAAT//3527 缺失//GGTCAGGGATCGATAGTTGACAAG），该片段的缺失导致基因组中的第二个外显子被敲除丢失。将这只首建雄鼠与C57BL/6J小鼠（品系货号 000664）交配进行种系传递。 在杂交之前，将其与C57BL/6J交配繁殖至少两代，以建立纯合突变体 B6.Rag1 KO鼠群。